Screening a cDNA Library for Protein–Protein Interactions Directly in Planta

現今技術多利用酵母菌來進行cDNA基因庫篩選蛋白質與蛋白質之間的交互作用。但是酵母菌進行植物蛋白交互作用研究可能導致誤判。因此本文利用植物原生質體及雙分子螢光互補作用(BiFC, Bimolecular fluorescence complementation)技術來進行欲測試蛋白質與cDNA基因庫中可交互作用的蛋白質篩選。我們將與植物轉殖相關的重要農桿菌的基因VirD2及VirE2基因接上YFP或Venus螢光蛋白的N端片段並將cDNA基因庫的基因接上YFP的C端片段。並且利用排列及混合cDNA基因庫的質體DNA (10個384孔盤、1個384孔盤以及384孔盤的行或列為一個單位)進行抽取，並利用阿拉伯芥葉片或菸草BY-2原生質體細胞及蘭花花瓣進行欲測試蛋白質與cDNA基因庫DNA的螢光互補作用試驗篩選，並將篩選出的單點clone進行螢光互補實驗確認,，証明此方法學可以應用在不同的植物物種中。實驗結果顯示，有5個新基因被找到且証明這些基因與農桿菌轉殖有關。
林崇熙

Lan-Ying Lee, Fu-Hui Wu, Chen-Tran Hsu, Shu-Chen Shen, Hsuan-Yu Yeh, De-Chih Liao, Mei-Jane Fang, Nien-Tze Liu, Yu-Chen Yen, Ladislav Dokládal, Eva Sýkorová, Stanton B. Gelvina and Choun-Sea Lin (2012) The Plant Cell, 24:1746-1759