原生質體技術在CRISPR/Cas9突變的應用:從單細胞突變檢測到植株的再生

植物原生質體可作為評估Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR)/CRISPR Associated Protein 9 (Cas9)突變效率的有效平台。我們改善多種植物原生質體分離與轉殖技術。同時發展菸草單細胞分離與單細胞突變並再生為植株的方法。經轉殖含有Cas9和sgRNAs的載體至原生質體中，目標序列可藉由DNA增值檢測其突變效率。我們以菸草單一原生質體進行phytoene desaturase (NtPDS)基因突變並再生為植株。菸草白化再生植株經檢測後，4個NtPDS對位基因皆發生突變，且大多數的菸草突變株都沒有檢測到外源基因Cas9 DNA插入菸草基因體中。

林崇熙*、徐振權、楊翎虹、李蘭瑛、富靖元、程喬薇、吳馥卉、蕭震緯、張業勝、張如、張菀蓉、尤貞婷、王文、廖麗貞、Stanton B. Gelvin*、施明哲* (2018) Plant Biotechnol J,