原生質體在CRISPR/Cas9突變技術之應用:從單細胞突變檢測到突變植物的再生
2018
徐振權, 楊翎虹, 李蘭瑛, 富靖元, 程喬薇, 吳馥卉, 蕭震瑋, 張業勝, 張如, 張菀蓉, 尤貞婷, 王文, 廖麗貞, Stanton B. Gelvin, 施明哲
植物原生質體為一評估CRISPR/Cas9基因編輯突變效率的有效分析方法。我們實驗室開發並改進了許多植物的原生質體分離與轉殖流程。同時建立菸草(Nicotianna tabacum)單細胞原生質體分離與突變植株再生技術。植物原生質體導入可轉譯Cas9蛋白與轉錄sgRNA的載體後，使用RFLP方法放大標靶DNA序列片段，可進行突變效率評估。使用菸草原生質體再生突變植株進行PDS基因目標靶位突變分析。從原生質體再生的4倍體菸草白化株進行基因型分析結果顯示，目標靶位的4個等位基因皆發生突變，且大部分的原生質體再生突變株皆沒有轉殖載體Cas9的外源基因序列檢出。